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​丹酚酸 B 检测方法

人阅读 发布时间:2017-12-28 17:59

在万众瞩目的淘宝双十一购物节时,阿里巴巴董事局主席马云发布了由他亲自主演的一个短片电影《功守道》,知名影星李连杰、甄子丹、吴京等均有出场。《功守道》为文化类公益短片,旨在宣扬中国传统文化,将太极拳等中华文化瑰宝推向整个世界。其间也穿插了其他的一些中国国粹——在其中的一幕,甄子丹在泡脚时,向水中加入了八味中药:丹参,赤芍,泽兰,王不留行、当归、大黄、牛膝、川芎。这些中药乃是知名药品“丹参泡脚片”的主方,用于足浴,可起到改善血液循环、清心活血、活血通经、消肿祛瘀的功效。

丹参泡脚片的主药是丹参。中药丹参是唇形科植物丹参 Salvia miltiorrhiza Bge. 的干燥根和根茎。味苦,微寒。有活血祛瘀,通经止痛,清心除烦,凉血消痈的功效。丹参的主要有效成分包括丹参酮类和丹酚酸等。丹酚酸(salvianolic acid)系丹参的水溶性有效成分,属酚酸类化合物。目前研究较多的有总丹酚酸(totalsalvianolic acid)、丹酚酸 A(salvianolic acid A, SalA)和丹酚酸 B(salvianolic acid B, SalB)。 

丹酚酸B为水溶性化合物,分子式为 C36H30O16,相对分子质量为 718.62。丹酚酸 B 也是丹酚酸的最主要成份。具有抗氧化、保护心脏、保护脑、纤维化、抗肿瘤等作用。下图为丹酚酸 B 结构式:
 
中国药典(2015版)中对丹参中的丹酚酸B检测作出了规定。RephiLe 根据药典与相关文献推出丹酚酸B含量检测解决方案。该方案采用 HPLC 检测。详细解决方案如下:
一、实验方法
高效液相色谱法(HPLC)

二、仪器和试剂
仪器:高效液相色谱仪,PURIST Pro 超纯水系统
试剂:丹酚酸 B 标注品

三、试验方法
1、色谱条件
采用 C18 色谱柱,A 相为甲基氰,B 相为 0.05% 磷酸水,梯度线性改变:0 min:19% A,81% B;15 min:23% A,77% B;30 min:25% A,75% B;40 min:90% A,10% B。检测波长:286 nm,流速 1.1 mL/min;柱温 30℃,进样体积 20 μL。
2、标准品溶液配制
使用 PURIST Pro 产超纯水,精准配置浓度为 1000 μg/mL 的丹酚酸 B 水溶液,置于棕色容量瓶中。
3、样品溶液制备
称取 0.15 g 样品粉末置于三角瓶中,加入 PURIST Pro 产超纯水 50 mL,超声处理 15 min,过滤,精密量取滤液 5 mL,移至 10 mL 容量瓶中,超纯水定量至刻度。用 0.45 μm 的 RephiQuik PES 针头式过滤器过滤后得试液。
4、标准曲线
分别精密吸取 1000 μg/mL 标准溶液 0.20 mL、0.40 mL、0.80 mL、1.60 mL、2.00 mL于 10 mL 容量瓶中,用 PURIST Pro 超纯水定容。分别进样进行 HPLC 分析,然后以峰面积为纵坐标,以丹酚酸 B 的含量为横坐标,绘制标准曲线。
   

 
5、试样测定
吸取 10 μL 试液进行 HPLC 分析,测定其峰面积,从标准曲线计算得试液中丹酚酸 B 的含量。
6、结果计算

HPLC 检测所需要的试剂都应该是色谱纯的试剂,纯水也不例外。乐枫提供的 PURIST Pro 超纯水系统以纯水为进水,生产超纯水,水质达到或超过 GB/T 6682-2008 的一级水标准和 GB/T 33087-2015 的高纯水标准。

       
关于 PURIST Pro 超纯水仪:
1. 使用两组大容量双管纯化柱,配合乐枫提供的最全系列的配方填料,灵活组合,精准满足用户的特定需求。乐枫的纯化柱耗材包含低有机物型、低硼型、ICP 型、低镁型等,适合 HPLC、GC-MS、ICP-MS 等高要求的仪器用水需求。
2. PURIST Pro 采用全氧化法在线检测 TOC,不但满足中国药典要求,也符合 ISPE 及 USP 对 TOC 检测方式必须通过基于完全氧化法设计的规定。
3. PURIST Pro 可配无线远程控制 Rephiblue APP,远程查询纯水系统运行状态,追溯水质历史数据,而且可进行取水分账号管理,最多可设立 10 个独立账户,满足现代实验室科学管理实验用水,精准核算科研项目成本的要求。

另外,乐枫可提供各类标准所需的中英文 3Q 认证和全套验证程序:IQ(安装确认),OQ(操作确认),PQ(性能确认)以及 GMP、GLP 环境下的维护程序,满足制药企业对于验证服务的需求。乐枫还可提供 Direct-Pure EDI 或 Direct-Pure RO 纯水系统配合 PURIST Pro 使用,为其提供合格的纯水,并满足实验室的日常清洗等使用。
通常试液上样前需要过滤,除掉试液内的颗粒及微生物,防止色谱柱堵塞、损坏泵等情况发生,保证仪器的操作性能及延长仪器使用寿命。乐枫提供 PES、Nylon、PTFE 等多种针头式过滤器,适用于各种水相及有机相的样品过滤,保证用户安全使用仪器。
 
关于上海乐枫生物科技有限公司
上海乐枫专业从事高端水纯化和实验室分离纯化产品的研发、设计和制造,致力于为生命科学和生物技术提供精锐品质、高附加值的创新产品。乐枫产品线包括实验室纯水系统、密理博纯水兼容耗材和实验室分离纯化产品。成立十年,乐枫创立出了自己的品牌 RephiLe(瑞枫),拥有 30 多项专利和多个软件著作权。产品销往全球近 90 个国家和地区。
更多 RephiLe 产品信息,请登陆:www.rephile.cn
RephiLe 企业微信名:乐枫纯水

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