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乐枫纯水为您解读实时荧光定量PCR实验用水
人阅读 发布时间：2020-02-27 19:38
文章要点：上海乐枫市场部对目前疫情防控工作中的荧光定量PCR的核酸检测技术做了深入浅出地阐述，并为该实验中使用的纯水设备做了解析和介绍。
转载请注明原文出处
目前疫情的防控工作取得了阶段性的成效，基于实时荧光定量PCR的核酸检测技术在新冠病毒快速鉴定及确诊中发挥了重要作用。
什么是实时荧光定量PCR？
实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技术，简称qPCR,是在PCR反应体系中加入荧光物质（荧光染料或荧光标记的特异性探针），利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
与普通PCR相比，实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃。运用该项技术，可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。
实验流程：
在实时荧光定量PCR实验中，可以分为样本采集，RNA提取，RNA质量鉴定，反转录及数据分析几个步骤，在进行引物、模板的稀释，试剂的配制和补足反应体系时都会用到水，水质量的好坏直接影响最终数据分析的结果。
水中的颗粒物，离子含量，有机物及细菌微生物等杂质对实验都会带来影响，最值得关注的因素有以下两个方面：
1. DNA酶和RNA酶
DNA酶和RNA酶能够特异性地降解DNA和RNA。在进行实时荧光定量PCR时，去除这两种酶从而保证提取的RNA和DNA样本的完整性十分关键。尤其在提取RNA的时候，RNA极易被降解。这是因为RNase非常稳定，且无处不在，用常规的高温高压蒸汽方法和蛋白酶抑制剂不能使所有的RNase完全失活。如果样本中的核酸被降解，会影响检测结果的准确性，甚至造成假阴性检测结果。
因此，实时荧光定量PCR实验用超纯水必须有效降低DNA酶和RNA酶的含量，减少对实验的影响。
2. 镁离子
实时荧光定量PCR实验需要根据不同的引物对和模板确定最佳的镁离子浓度。
Mg2+浓度过低，会影响DNA聚合酶的活性，导致产量降低，影响实时定量的敏感性；
Mg2+浓度过高，会增加引物二聚体的形成，这会影响特异性。
因此，实时荧光定量PCR实验用超纯水必须控制Mg2+浓度，避免背景因素带来的不确定性。
综上，实时荧光定量PCR实验推荐使用超纯水，水质要求如下图所示：
纯水仪器选型推荐：
根据上述的分析和用水指标，可以采用乐枫的Genie G一体超纯水机和Genie PURIST超纯水机，这两种纯水设备都可以满足实时荧光定量PCR反应的用水要求。
GenieG和Genie PURIST纯水设备是上海乐枫RephiLe为e 时代的实验室纯水需求开发的智能型实验室纯水系统。
采用了无线技术，主机、主控屏和手柄之间采用无线连接，按需随意放置。
耗材/ 零部件实现了可全程追溯，全方位监控的要求，防水的控制屏可带手套操作。
Genie纯水仪设计紧凑，体积小，可挂墙，可置于台盆下，方便用户合理利用空间。
其中，GenieG采用了EDI模块，可从自来水制备超纯水和EDI纯水，为实验不同需要带来方便。Genie PURIST则是从纯水制备超纯水的一款仪器，安装使用非常方便。
该两款设备还有两个很重要的优势可以适用于qPCR实验：
Genie系列超纯水机，可以配置乐枫RephiLe配方填料的低镁型纯化柱，不但可以广谱去除水中的金属离子，还可以特异性去除水中的镁离子，保证超纯水中Mg2+对qPCR实验零干扰。这种低镁型纯化柱是乐枫独家提供，专为PCR和测序实验研究开发的产品。
装有带电荷尼龙膜的RephiBio终端滤器。 RephiBio可以除DNA酶和RNA酶，避免核酸酶对实验的影响。
配备了低镁型纯化柱和RephiBio，GenieG和GeniePURIST可以为你的荧光定量PCR反应保驾护航。
关键词：新冠肺炎,纯水, qPCR, 聚合酶链式反应, Taq酶, 上海乐枫, RephiLe, Genie 纯水机, Super-Genie 纯水机
转载请注明原文出处
目前疫情的防控工作取得了阶段性的成效，基于实时荧光定量PCR的核酸检测技术在新冠病毒快速鉴定及确诊中发挥了重要作用。
什么是实时荧光定量PCR？
实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技术，简称qPCR,是在PCR反应体系中加入荧光物质（荧光染料或荧光标记的特异性探针），利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
实验流程：
水中的颗粒物，离子含量，有机物及细菌微生物等杂质对实验都会带来影响，最值得关注的因素有以下两个方面：
1. DNA酶和RNA酶
DNA酶和RNA酶能够特异性地降解DNA和RNA。在进行实时荧光定量PCR时，去除这两种酶从而保证提取的RNA和DNA样本的完整性十分关键。尤其在提取RNA的时候，RNA极易被降解。这是因为RNase非常稳定，且无处不在，用常规的高温高压蒸汽方法和蛋白酶抑制剂不能使所有的RNase完全失活。如果样本中的核酸被降解，会影响检测结果的准确性，甚至造成假阴性检测结果。
因此，实时荧光定量PCR实验用超纯水必须有效降低DNA酶和RNA酶的含量，减少对实验的影响。
2. 镁离子
实时荧光定量PCR实验需要根据不同的引物对和模板确定最佳的镁离子浓度。
Mg2+浓度过低，会影响DNA聚合酶的活性，导致产量降低，影响实时定量的敏感性；
Mg2+浓度过高，会增加引物二聚体的形成，这会影响特异性。
因此，实时荧光定量PCR实验用超纯水必须控制Mg2+浓度，避免背景因素带来的不确定性。
综上，实时荧光定量PCR实验推荐使用超纯水，水质要求如下图所示：
纯水仪器选型推荐：
根据上述的分析和用水指标，可以采用乐枫的Genie G一体超纯水机和Genie PURIST超纯水机，这两种纯水设备都可以满足实时荧光定量PCR反应的用水要求。
南科大安装的 Genie G
GenieG和Genie PURIST纯水设备是上海乐枫RephiLe为e 时代的实验室纯水需求开发的智能型实验室纯水系统。
采用了无线技术，主机、主控屏和手柄之间采用无线连接，按需随意放置。
耗材/ 零部件实现了可全程追溯，全方位监控的要求，防水的控制屏可带手套操作。
Genie纯水仪设计紧凑，体积小，可挂墙，可置于台盆下，方便用户合理利用空间。
其中，GenieG采用了EDI模块，可从自来水制备超纯水和EDI纯水，为实验不同需要带来方便。Genie PURIST则是从纯水制备超纯水的一款仪器，安装使用非常方便。
该两款设备还有两个很重要的优势可以适用于qPCR实验：
Genie系列超纯水机，可以配置乐枫RephiLe配方填料的低镁型纯化柱，不但可以广谱去除水中的金属离子，还可以特异性去除水中的镁离子，保证超纯水中Mg2+对qPCR实验零干扰。这种低镁型纯化柱是乐枫独家提供，专为PCR和测序实验研究开发的产品。
装有带电荷尼龙膜的RephiBio终端滤器。 RephiBio可以除DNA酶和RNA酶，避免核酸酶对实验的影响。
配备了低镁型纯化柱和RephiBio，GenieG和GeniePURIST可以为你的荧光定量PCR反应保驾护航。
中科大安装的 Genie PURIST
Genie系列纯水机水质稳定，品质高，而且有数据保证：水质已经通过第三方省级以上检测机构的检测；RephiBio终端过滤器，也具有国外实验室热源、DNase和RNase的检测报告。使用Genie系列超纯水机，可以确保超纯水对qPCR反应的不确定性降至最低，让用户“用水无忧”，享受高端的体验。
关键词：新冠肺炎,纯水, qPCR, 聚合酶链式反应, Taq酶, 上海乐枫, RephiLe, Genie 纯水机, Super-Genie 纯水机
上海乐枫生物科技有限公司
上海乐枫(Rephile Bioscience，Ltd.) 是一家专业从事高端水纯化和实验室分离纯化产品研发、设计和制造的企业，为高科技生物技术和生命科学领域的用户服务。乐枫公司着眼于全球发展，在中国、美国、法国、印度、南非等近20个国家建立了销售机构，同时也为国际大型公司提供OEM和ODM，产品销往包括欧美的近100个国家。成立十余年，乐枫持续投入研发，创立出了自己的产品品牌RephiLe（瑞枫），推出了多个新概念产品- 无线连接的Genie系列纯水系统和智能型大流量纯水工作站Super-Genie等。目前乐枫纯化柱填料配方齐全，也提供多款密理博纯水系统的兼容耗材。
关键词：纯水, 超纯水, EDI, 取水，过滤, 无菌, RephiLe, Genie 纯水机, Super-Genie 纯水机
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