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乐枫纯水为您解读实时荧光定量PCR实验用水

发布时间:2020-02-27 19:38 |  点击次数:

文章要点:上海乐枫市场部对目前疫情防控工作中的荧光定量PCR的核酸检测技术做了深入浅出地阐述,并为该实验中使用的纯水设备做了解析和介绍。
转载请注明原文出处


目前疫情的防控工作取得了阶段性的成效,基于实时荧光定量PCR的核酸检测技术在新冠病毒快速鉴定及确诊中发挥了重要作用。


什么是实时荧光定量PCR?


实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技术,简称qPCR,是在PCR反应体系中加入荧光物质(荧光染料或荧光标记的特异性探针),利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
 

与普通PCR相比,实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃。运用该项技术,可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。
实验流程:
在实时荧光定量PCR实验中,可以分为样本采集,RNA提取,RNA质量鉴定,反转录及数据分析几个步骤,在进行引物、模板的稀释,试剂的配制和补足反应体系时都会用到水,水质量的好坏直接影响最终数据分析的结果。


水中的颗粒物,离子含量,有机物及细菌微生物等杂质对实验都会带来影响,最值得关注的因素有以下两个方面:


1. DNA酶和RNA酶
DNA酶和RNA酶能够特异性地降解DNA和RNA。在进行实时荧光定量PCR时,去除这两种酶从而保证提取的RNA和DNA样本的完整性十分关键。尤其在提取RNA的时候,RNA极易被降解。这是因为RNase非常稳定,且无处不在,用常规的高温高压蒸汽方法和蛋白酶抑制剂不能使所有的RNase完全失活。如果样本中的核酸被降解,会影响检测结果的准确性,甚至造成假阴性检测结果。
因此,实时荧光定量PCR实验用超纯水必须有效降低DNA酶和RNA酶的含量,减少对实验的影响。


2. 镁离子
实时荧光定量PCR实验需要根据不同的引物对和模板确定最佳的镁离子浓度。
Mg2+浓度过低,会影响DNA聚合酶的活性,导致产量降低,影响实时定量的敏感性;
Mg2+浓度过高,会增加引物二聚体的形成,这会影响特异性。
因此,实时荧光定量PCR实验用超纯水必须控制Mg2+浓度,避免背景因素带来的不确定性。

综上,实时荧光定量PCR实验推荐使用超纯水,水质要求如下图所示:
 

纯水仪器选型推荐:


根据上述的分析和用水指标,可以采用乐枫的Genie G一体超纯水机和Genie PURIST超纯水机,这两种纯水设备都可以满足实时荧光定量PCR反应的用水要求。
南科大安装的 Genie G


GenieG和Genie PURIST纯水设备是上海乐枫RephiLe为e 时代的实验室纯水需求开发的智能型实验室纯水系统。
采用了无线技术,主机、主控屏和手柄之间采用无线连接,按需随意放置。
耗材/ 零部件实现了可全程追溯,全方位监控的要求,防水的控制屏可带手套操作。
Genie纯水仪设计紧凑,体积小,可挂墙,可置于台盆下,方便用户合理利用空间。
其中,GenieG采用了EDI模块,可从自来水制备超纯水和EDI纯水,为实验不同需要带来方便。Genie PURIST则是从纯水制备超纯水的一款仪器,安装使用非常方便。

该两款设备还有两个很重要的优势可以适用于qPCR实验:
 Genie系列超纯水机,可以配置乐枫RephiLe配方填料的低镁型纯化柱,不但可以广谱去除水中的金属离子,还可以特异性去除水中的镁离子,保证超纯水中Mg2+对qPCR实验零干扰。这种低镁型纯化柱是乐枫独家提供,专为PCR和测序实验研究开发的产品。
 装有带电荷尼龙膜的RephiBio终端滤器。 RephiBio可以除DNA酶和RNA酶,避免核酸酶对实验的影响。
配备了低镁型纯化柱和RephiBio,GenieG和GeniePURIST可以为你的荧光定量PCR反应保驾护航。
 
中科大安装的 Genie PURIST
 
Genie系列纯水机水质稳定,品质高,而且有数据保证:水质已经通过第三方省级以上检测机构的检测;RephiBio终端过滤器,也具有国外实验室热源、DNase和RNase的检测报告。使用Genie系列超纯水机,可以确保超纯水对qPCR反应的不确定性降至最低,让用户“用水无忧”,享受高端的体验。

关键词:新冠肺炎,纯水, qPCR, 聚合酶链式反应, Taq酶, 上海乐枫, RephiLe, Genie 纯水机, Super-Genie 纯水机
 

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上海乐枫(Rephile Bioscience,Ltd.) 是一家专业从事高端水纯化和实验室分离纯化产品研发、设计和制造的企业,为高科技生物技术和生命科学领域的用户服务。乐枫公司着眼于全球发展,在中国、美国、法国、印度、南非等近20个国家建立了销售机构,同时也为国际大型公司提供OEM和ODM,产品销往包括欧美的近100个国家。成立十余年,乐枫持续投入研发,创立出了自己的产品品牌RephiLe(瑞枫),推出了多个新概念产品- 无线连接的Genie系列纯水系统和智能型大流量纯水工作站Super-Genie等。目前乐枫纯化柱填料配方齐全,也提供多款密理博纯水系统的兼容耗材。

关键词:纯水, 超纯水, EDI, 取水,过滤, 无菌, RephiLe, Genie 纯水机, Super-Genie 纯水机

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